碘化钾预防孢子丝菌病的实验研究
碘化钾预防孢子丝菌病的实验研究中华皮肤科杂志1998年第5期第31卷论著作者:姜兰香段正芳张民夫苏忠兰王延龙单位:130041长春,白求恩医科大学第二临床学院皮肤科关键词:孢子丝菌病;碘化钾;预防;实验动物【摘要】目的研究低治疗量碘化钾对孢子丝菌病发病的影响,为预防本病提供理论依据。方法采用含碘化钾的饮水饲养实验鼠,并设对照组,2周后行腹腔接种孢子丝菌,于接种后的第3~8周,每周分批处死实验鼠,剖检,观察发病情况、病理学改变及真菌学所见。结果实验鼠本病的发病率显著下降(P<0.01),其下降与碘化钾的用量有关。结论低治疗量碘化钾具有预防孢子丝菌病发病的作用。PotassiumIodideinthePreventionofSporotrichosisinExperimentalAnimalJiangLanxiang,DuanZhengfang,ZhangMinfu,etal.DepartmentofDermatology,SecondClinicalCollege,NormanBethuneUniversityofMedicalSciences,Changchun130041【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofpotassiumiodideontheincidenceofsporotrichosis,andprovidethetheoreticalbasisforthepreventionofsporotrichosis.MethodsExperimentalmiceweredividedinto4groups,group1~3werefedwithwatercontainingdifferentdosesofpotassiumiodide,andnopotassiumiodidewasgiventothecontrolgroup.Aftertwoweeks,thefungiwereinoculatedintraperitoneallytoallthemice.Inthethirdtotheeighthweeks,themiceweresacrificedeveryweekinbatches.Theinfection,pathologicalchangesandmycologicalfindingsofthemicewereobserved.ResultsTheincidencerateofexperimentalsporotrichosiswassignificantlydecreasedinthemice(P<0.01),andthedecreasewasrelatedtothedosageofpotassimuiodide.ConclusionTheresultsshowthatpotassiumiodidemaybeofuseinthepreventionofsporotrichosis.【Keywords】SporotrichosisPotassiumIodidePreventionExperimentalanimal多年来,有关孢子丝菌病诊治方面已有很多报道,但对其发病方面的研究不多,现将我们通过动物实验研究的低治疗量碘化钾对孢子丝菌病发病的影响结果报道如下。资料和方法(一)资料:申克孢子丝菌:自本科门诊固定型孢子丝菌病患者分离获得。动物:昆明种远交系雄性健康小白鼠,6周龄,平均体重为20g,长春生物制品所实验动物部提供,合格证号0001604。试剂:10%碘化钾溶液,白求恩医科大学二院制剂室提供。培养基:沙堡琼脂、胱氨酸葡萄糖血琼脂按照王高松[1]的方法制备。(二)细胞悬液的制备:将经胱氨酸葡萄糖血琼脂培养基37℃培养1周的申克孢子丝菌酵母型菌落挑出,用生理盐水制成细胞悬液。以消毒纱布过滤,滤液2000r/min离心10分钟,弃上清液,然后以血球计数器配成1×108个孢子/ml的细胞悬液。(三)动物分组、接种、取材、观察:120只小白鼠随机分成4组,即实验1、2、3组与对照组。从实验前2周开始,各组的每只小鼠每日以微量加样器分别给予10%碘化钾溶液0.005ml、0.003ml、0.002ml、0ml,加入瓶塞上装有可自动吸水的金属饮水管的玻璃瓶中;并各加自来水至4ml,饮用2周。各小鼠于实验前1天行腹部右侧剃毛,碘酒、酒精消毒皮肤后,行腹腔接种细胞悬液0.2ml(相当于孢子2×107个)。接种后第3~8周,每周各组均处死5只小鼠,剖检、观察发病情况、各脏器及皮损的病理学改变。并对脏器、皮损、腹腔液、心血做真菌学培养。(四)实验数据统计学处理方法:各组间发病率的比较采用两样本率比较的χ2检验。结果一、皮肤发病情况及发病率接种后,共有54只小鼠出现皮损(占45%)。于接种后第20~38天,尾部出现结节,米粒至黄豆粒大小,数目1~13个。部分结节出现10天后形成溃疡。各组发病率:实验1组(0/30例)0%;实验2组(2/30例)6.67%;实验3组(24/30例)80%;对照组(28/30例)93.33%;经χ2检验,实验1、2组与对照组比较有显著性差异(χ2值分别为52.50、45.06,P<0.01),实验3组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。二、内脏发病情况及发病率剖检各鼠,出现内脏损害的共15只(12.5%)。接种后的第3~6周见病鼠肝脏、肠系膜、睾丸有数个粟粒大小灰白色结节。发病率:实验1组(0/30例)0%;实验2组(0/30例)0%;实验3组(4/30例)13.33%;对照组(11/30例)36.67%。内脏病变均见于出现皮损的小鼠。三、病理学检查组织病理:对各鼠的皮损、各个脏器每种标本均各取材2份。HE染色:皮损共取材108份,表现为化脓性肉芽肿62份;弥漫性多形细胞性肉芽肿33份;三区病变(中央为中性粒细胞浸润,中间见少量上皮样细胞,周边淋巴细胞和浆细胞浸润)9份;结核样肉芽肿4份。120只小鼠每种脏器均取材,各240份,肉眼见灰白色小结节处组织病理改变为:化脓性肉芽肿:肝脏8/240份、肠系膜4/240份、睾丸5/240份;弥漫性多形细胞性肉芽肿:肝脏19/240份、肠系膜25/240份、睾丸21/240份;结核样肉芽肿:肝脏3/240份、肠系膜1/240份、睾丸4/240份;未见三区病变。当然所见各类型也不是绝对的,有的同一张切片不同部位可见不同类型的炎症浸润。PAS染色:皮损查到孢子86/108份(占79.63%);肝脏、肠系膜、睾丸查到孢子53/240份(占22.08%)。切片中孢子多少不一,染成紫红色圆形、卵圆形或芽生孢子,并见星状体,主要位于脓肿部位。四、真菌学培养(沙堡琼脂)1.试管培养:每鼠脏器、皮损、血液、腹腔液均取材2份,每份接种5管,25℃培养2周,判定结果。阳性:5管中只要有1管长出孢子丝菌则记阳性;阴性:5管均无菌生长或未见可疑本菌初代菌落长出而有污染菌生长者皆为阴性。培养阳性率:皮损(104/108份)96.29%、腹腔液(52/240份)21.67%、肝脏(29/240份)12.08%、肠系膜(28/240份)11.67%、睾丸(26/240份)10.83%,其余脏器(包括血液)均阴性。腹腔液真菌培养阳性率第3周最高,随时间推移呈下降趋势,至第6周时已全部阴性(各周培养情况见附表)。2.平皿培养:对试管培养阳性者均做平皿培养。25℃,2周均长出典型孢子丝菌菌落,黑褐色,中央隆起,有皱褶,高低不平,菌落边缘有少量菌丝。3.玻片培养(小培养):对试管培养阳性者均作玻片培养。25℃,2周,光镜下见典型的孢子丝菌形态,菌丝细长分隔,侧生菌丝多呈直角,顶端有椭圆形小分生孢子,呈花瓣状分布。附表小鼠口服低剂量碘化钾对腹腔注射孢子丝菌的预防作用组别取材(份/周)腹腔液真菌培养阳性(份/周)3周4周5周6~8周实验1组104300实验2组103210实验3组109520对照组1010760讨论本研究共对120只小白鼠行腹腔接种孢子丝菌细胞悬液,发现54只(45%)鼠尾部发生皮损,且其中15只(12.5%)小鼠于肝脏、肠系膜、睾丸见数个灰白色粟粒大小结节,所见及其组织学改变与张民夫等[2]报道一致。碘化钾为治疗孢子丝菌病的首选药物,作用机理不完全清楚,通常成人治疗剂量为2~3g/d,分3次口服,也有人[3]主张1.5~2g/d作为治疗剂量,故本实验动物服用10%碘化钾溶液量是按成人体重60kg给予碘化钾1.5g/d换算成小白鼠20g体重的用量0.005ml/d(含500μg)为实验1组用量,0.9g/d换算成0.003ml/d(含300μg)为实验2组用量,0.6g/d换算成0.002ml/d(含200μg)为实验3组用量。实验结果显示低治疗量碘化钾对孢子丝菌病有预防作用,本实验最低预防量为20g体重小鼠给10%碘化钾溶液0.003ml/d,用药时间为2周,从而为临床上高发区及流行区该病的预防提供一定的理论依据,以降低发病率。当然此研究仅限于动物实验,尚有许多问题,如用碘化钾后,碘在体内含量的追踪观察、每日用碘化钾的次数以及今后如何进行临床应用等问题有待进一步研究。志谢本文数据由白求恩医科大学统计教研室赵恒玺教授处理中华医学会皮肤科学会科研基金资助参考文献1王高松.临床真菌病学.第一版.上海:复旦大学出版社,1986.1,348-352.2张民夫,张亚芹,姜萍,等.从芦苇中分离孢子丝菌的研究.中华皮肤科杂志,1996,29∶322-323.3VrabeH,HorboS.Sporotrichosis.IntJDermatol,1986,25∶255-256.(责任编辑:zxwq)